Плехова Наталья Геннадьевна, зав. Лаборатории патоморфологии и электронной микроскопии НИИ эпидемиологии и микробиологии СО РАМН г. Владивосток «Влияние корректора функционального состояния на метаболизм клеток врожденного иммунитета»  
 
   3-я НАУЧНО-ПРАКТИЧЕСКАЯ КОНФЕРЕНЦИЯ 2011 г. Москва 
 
 Новые сиреневые КФС №9–№16 

 

 (вторая научно-медицинская конференция) 
 


Я хочу поблагодарить оргкомитет за приглашение, я как раз отношусь к тем людям, которым дали «в темную» этот прибор, и на примере своих клеточек, я действительно обнаружила его воздействие. Мой доклад называется «Влияние корректоров Функционального состояния на клетки врожденного иммунитета».
К ряду проблем, порожденных современной техногенной цивилизацией, относится нарастание экологического кризиса в глобальных масштабах. В аспекты человеческого существования как деятельного существа, преобразующего природу, приходит конфликтное состояние. Особенно это проявляется в человеческом организме, который теряет свое  гомеостатическое состояние. в первую очередь страдает его иммунная система, объединяющая органы и ткани, которая защищает организм от заболеваний, идентифицирует и уничтожает патогенные и опухолевые клетки. Эта система распознает множество разнообразных возбудителей – от вирусов до паразитических червей, и отличает их от биомолекул и собственных клеток.
 

 

 
Иммунная система защищает организм от инфекций в несколько этапов, при этом на каждом из этапов проявляется ее специфичность. За первую линию защиты отвечает врожденная иммунная система, которая включает популяцию фагоцитарных клеток – это популяция моноцитарных клеток: моноциты и макрофаги, ….. происхождения  нейтрофилы и базофилы, и киллерные клетки.
Функции клеток врожденного иммунитета сильно отличаются от адаптивного иммунитета, тем что они распознают патогенны с помощью наследственно закодированных  рецепторов, что означает генетическую предопределенность специфичности каждого рецептора. Одним из преимуществ закодированности рецепторов является их эволюционирование при естественном отборе в направлении специфичности к инфекционным агентам.
Нейтрофилы являются коротко живущими, но самыми многочисленными  белыми клетками крови. Им отведена главная роль в разрушении микробицидных компонентов, а так же вирусов. Участие нейтрофилов в  патогенезе острого воспаления обусловлено следующими основными причинами:
Эти клетки богаты цитотоксическими компонентами, они обладают высокой чувствительностью ко всевозможным локальным изменениям гомеостаза. Способностью накапливаясь в очаге поражения инициировать цепную реакцию с привлечением клеток адаптивного иммунитета и появлением пресекреции биологически активных веществ, которые являются предшественниками активных медиаторов воспаления.
Нейтрофилы также принимают  участие в реализации иммунокомпетентных повреждений тканей.
Моноциты и макрофаги относятся к длительно живущим фагоцитирующим клеткам организма и обладают похожей функцией (как и нейтрофилы), но у них цититоксическая составляющая намного меньше, чем у нейтрофилов.
Комплексные исследования различных проявлений реактивности фагоцитирующих клеток основаны как на количественном определении ферментативной активности, так и на оценке способности клетки к активации систем под влиянием специфического иммунитета, позволяет подойти к углубленной оценке роли этих клеток  в защите организма.
Целью нашего исследования было изучить влияние  корректора функционального состояния  на функциональную активность клеток врожденного иммунитета. Мы исследовали фагоцитирующую популяцию клеток периферической крови донора и оценивали их функциональное состояние по ферментам, по адгезивной способности и так же оценивали их стимулирующую активность.

 
На слайде (справа) представлены интактные клетки, которые  не подвергались воздействию КФС,  а слева те клетки, на которые воздействовали КФС в течение 15 минут. Интактные клетки, как вы видите, имеют  веретенообразную форму, вытянутые, и после воздействия КФС  они округляются, что доказывает их стимуляцию.
На следующем слайде показаны фотографии, полученные методом сканирующей электронной микроскопии. Точно так же справа располагаются  интактные клетки моноцитарной  …..  популяции, и клетки после 15 минутного воздействия Корректора  Функционального Состояния.

 
Нейтрофилы, вы видите справа показаны клетки, которые находятся в свободном кровотоке – как они у нас выглядят м те клетки, которые адгезированы к поверхности стекла. После того как С помощью КФС воздействуют на эту популяцию клеток, мы видим специфическую реакцию,  которая выражается в изменении топографии поверхности этих клеток, и появлении многочисленных специфических рецепторов. Известно состояние клеток, так называемое, редокс – исходное и праймированное. В праймированном состоянии доказано, что нейтрофилы и моноциты макрофаги более активно поглощают инфекционные агенты и более активно выступают на стадии защиты организма. Так вот, КФС действительно их подготавливает к такой защите.
На следующем слайде представлены фотографии, которые доказывают, что после воздействия КФС на клетки, с помощью различных методов мы определяли некроз т апоптоз. Справа клетки окрашенные оранжевым, и после воздействия КФС мы не обнаруживаем клетки желтого цвета свечения, который указывает на некроз. И слева клетки окрашенные специфическим красителем на апоптоз, как вы знаете это запрограммированная гибель клеток, так же мы не видим влияния КФС на эти клетки.

 
Следующий слайд.  Адгезивность это одно из свойств клеток врожденного иммунитета. Она выражается в способности прикрепляться к определенным субстратам и задерживаться на них, имеет очень важное функциональное значение. Поскольку  большинство физиологических и патологических реакций, в который участвуют нейтрофилы, совершается в тканях. Адгезия фагоцитирующих клеток к субстрату является одним из  факторов активации, необходимых для  осуществления основных функций, которые несут эти клетки. Адгезия фагоцитирующих клеток  к своим мишеням обусловлена наличием на поверхности этих клеточных элементов рецепторов для молекул объекта, собственных или связавшихся  с  ними. При исследовании адгезивной способности фагоцитирующих клеток крови под воздействием КФС было установлено повышение этого свойства клеток  (активность). Максимальный показатель адгезивной активности фагоцитов под воздействием КФС может быть одним из возможных механизмов активации бактерицидной активности клеток.
 

 
Для фагоцитов при фаго…. и экзоцитозе  при проявлении основных функций характерно постоянное потребление плазматической мембраны, которая компенсируется перманентным синтезом ее компонентов. Определение активности  потребления  …. мембраны фагоцитирующих клеток, к которым  …. относят пять штрих нуклеатидазу  позволяет оценить степень  стимуляции этих клеток.  Для того, чтобы подтвердить отсутствие цитотоксичности и воздействие КФС на фагоцитирующие клетки мы исследовали активность … гидрогеназы.   Этот тест основан на том, что если понижается активность этого фермента – это указывает на то, что клетка повреждена. Как видите, мы установили повышение активности этого фермента в начальный период.

 
Следующий слайд.  Здесь представлено доказательство того, что под воздействием КФС на начальном этапе клетка начинает двигаться.  Оценка активности фермента АТФ фазы пять штрих нуклетидазы доказывает, что клетка приходит в стимулированное состояние.

 
Следующий слайд доказывает, что КФС влияет на активность пять штрих нуклеатидазы, которая так же уменьшается.

 
Для того, чтобы оценить кислородозависимую систему фагоцитов, которая отвечает за разрушение различных патогенов, применяется   НСТ  тест. При исследовании воздействия КФС с помощью НСТ теста нами было установлено повышение активности этих клеток, что показывает повышение защитной способности фагоцитирующих клеток.
Итак, известно что система фагоцитирующих клеток нейтрофилов и макрофагов, являясь звеном быстрого реагирования, играет важнейшую роль не  только в антибактериальной, но и противоопухолевой защите организма, а также в аллергических реакциях немедленной гиперчувствительности. В настоящее время данную систему рассматривают как совокупность иммунокомпетентных, иммунорегуляторных клеток, участвующих в  межклеточных контактах и взаимодействиях, формирующих иммунный гомеостаз. От функциональной полноценности данных клеток во многом зависит генез, течение и исход многих патологических состояний организма.

 

 

 

 
 
Реактивные формы кислорода, произведенные стимулированными фагоцитами, используются этими клетками для уничтожения патогенных микроорганизмов. При стимуляции фагоцитов на первом этапе происходит образование супероксидного  анионного радикала  путем передачи ему электрона от  молекулярного кислорода, тогда как на втором супероксидный анион преобразуется в  следующий мощный окислительный компонент  - перекись водорода, и именно эту активность клеток мы и исследовали.
Таким образом, изучены цитотоксические и адгезивные свойства фагоцитирующих клеток при воздействии на них КФС.  И комплексные исследования состояния клеток врожденного иммунитета показало выраженное стимулирующее воздействие корректоров  функционального состояния. Это может стать решающим фактором, определяющим перспективность его применения в качестве иммуностимулирующего средства, в частности для повышения естественной резистентности организма  к возбудителям различных инфекционных заболеваний.